Desarrollo de un método ELISA indirecto para la detección de anticuerpos IgG contra el coronavirus del síndrome de diarrea aguda porcina basado en proteína de pico recombinante

El coronavirus del síndrome de diarrea aguda porcina (SADS-CoV) es un coronavirus patógeno entérico porcino recientemente descubierto que puede causar diarrea acuosa en lechones recién nacidos y causar pérdidas económicas significativas a la industria porcina.En la actualidad, no existe un método serológico adecuado para evaluar la eficacia de la infección por SADS-CoV y la vacuna, por lo que existe una necesidad urgente de utilizar un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) eficaz para compensar esta deficiencia.Aquí, se construyó un plásmido recombinante que expresa la proteína de punta (S) SADS-CoV fusionada con el dominio Fc de IgG humano para producir baculovirus recombinante y se expresó en células HEK 293F.La proteína S-Fc se purifica con resina de proteína G y conserva la reactividad con anticuerpos anti-Fc humano y anti-SADS-CoV.Luego se usó la proteína S-Fc para desarrollar ELISA indirecto (S-iELISA) y optimizar las condiciones de reacción de S-iELISA.Como resultado, al analizar el valor de OD450nm de 40 sueros SADS-CoV negativos confirmados por ensayo de inmunofluorescencia (IFA) y transferencia Western, se determinó que el valor de corte era 0,3711.El coeficiente de variación (CV) de los 6 sueros positivos para SADS-CoV dentro y entre ejecuciones de S-iELISA fue inferior al 10 %.La prueba de reactividad cruzada mostró que S-iELISA no tiene reactividad cruzada con otros sueros de virus porcinos.Además, según la detección de 111 muestras clínicas de suero, la tasa de coincidencia general de IFA y S-iELISA fue del 97,3 %.La prueba de neutralización de virus con 7 valores diferentes de OD450nm de suero mostró que el valor de OD450nm detectado por S-iELISA se correlacionó positivamente con la prueba de neutralización de virus.Finalmente, se realizó S-iELISA en 300 muestras de suero de granja porcina.Los kits comerciales de otros enterovirus porcinos mostraron que las tasas de IgG positivas de SADS-CoV, TGEV, PDCoV y PEDV fueron del 81,7 %, 54 % y 65,3 %, respectivamente., 6%, respectivamente.Los resultados muestran que el S-iELISA es específico, sensible y reproducible, y puede usarse para detectar la infección por SADS-CoV en la industria porcina.Este artículo está protegido por derechos de autor.reservados todos los derechos.